产品描述：

DiO是一种亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。进入细胞膜后，DiO在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。DiO在进入细胞膜之前荧光非常弱，当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，被激发后可以发出绿色的荧光，具有很高的淬灭常数和激发态寿命。可以用标准的FITC滤光片检测。

DiO通常不会明显影响细胞的生存力，因此被广泛用于正向或逆向的，活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂（long-term tracer）。除了最简单的细胞膜荧光标记外，还可以用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程中细胞迁移，通过FRAP（Fluorescence Recovery After Photobleaching）检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。

 

验证结果：

      

                      白光对照                                                         DiI 加入15分钟

产品性质
 

运输与保存方法
 

冰袋运输。产品-20 ºC干燥避光保存，有效期1年。

注意事项
 

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2）染色固定的细胞或组织时，通常使用配制在PBS中的4%多聚甲醛固定，使用其它不适当固定液会导致荧光背景较高。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法
 

1. 染色液制备

（1）配置DMSO或EtOH 储存液：储存液用DMSO或EtOH配置浓度1～2 mM。

注：
a、未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，可稳定保存6个月。   
b、发现较难溶解时可以适当加热，并用超声处理以促进溶解。
c、必须保证所用溶剂新鲜无水。

（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1～5 μM的工作液。
注：工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。

2. 悬浮细胞染色

（1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×10⁶/mL。
（2）37℃孵育细胞2～20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20 min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

（3）孵育结束，按1000～1500 rpm离心5 min。

（4）倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。

（5）重复（3）,（4）步骤两次以上。

3. 贴壁细胞的染色

（1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。

（3）在盖玻片的一角加入100 μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
（4）37℃孵育细胞 2～20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10 min，然后吸干培养基。