产品描述：

        DiI, DiO, DiD和DiR作为一类长链的亲脂性二烷基碳菁类染料（Dialkylcarbocyanines）荧光染料家族，用于标记细胞膜以及其他脂溶性生物结构。作为一类环境敏感型荧光染料，当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子（例如蛋白质，虽然在水中其荧光强度很弱）结合时，其荧光强度显著增强。一旦进入细胞后，它们在细胞内质膜中逐步扩散，于最佳浓度条件下可将整个细胞均匀染色。这些染料具很高的淬灭系数，偏光依赖性和很短的激发寿命。

        四种染料呈现不同的荧光颜色，DiI（橙色荧光）、DiO（绿色荧光）、DiD（红色荧光）、DiR（深红色荧光），为活细胞多色彩荧光成像分析和流式细胞术提供了一种便捷的工具。DiO和DiI分别用标准FITC和TRITC滤光器检测，可结合使用。其中，DiI及其衍生物由于极其低的细胞毒性，应用最为广泛。不仅普遍用于活体和固定组织及细胞的神经元逆行性和顺行性示踪分析，还可以用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程的细胞迁移，通过FRAP（荧光光漂白恢复技术）检测脂质在细胞膜上的扩散过程，检测细胞毒性，以及标记脂蛋白如LDL和HDL等。

验证结果：

      

                      白光对照                                                         DiI 加入15分钟

 

 

自备试剂及耗材：

吸头/吸水纸/离心管

保存说明：

-20 ºC,避光保存

使用说明：

1. 工作液制备：取1ul DiI染色剂用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）1ml稀释，配制成工作液。

2. 贴壁细胞的染色（以24孔板为例）：

a. 将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

b. 从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。

c. 在盖玻片的一角加入100 μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

d. 37℃孵育细胞 2～20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

e. 吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10 min，然后吸干培养基。

3.悬浮细胞染色

a. 加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。

b. 37℃孵育细胞2～20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20 min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

c. 孵育结束，按1000～1500 rpm离心5 min。

d. 倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。

e. 重复c,d步骤两次以上。

注意事项：

1. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2. 染色固定的细胞或组织时，通常使用配制在PBS中的4%多聚甲醛固定，使用其它不适当固定液会导致荧光背景较高。

3. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。