产品描述：

DiI是一种亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构，进入细胞膜后，DiI在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。DiI在进入细胞膜之前荧光非常弱，当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，DiI被激发后可以发出橙红色的荧光，具有很高的淬灭常数，中等强度的光量子和很短的激发态寿命。可以用标准的TRITC滤光片检测。

DiI通常不会明显影响细胞的生存力，因此被广泛用于正向或逆向的，活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂（long-term tracer）。除了最简单的细胞膜荧光标记外，还可以用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程中细胞迁移，通过FRAP（Fluorescence Recovery After Photobleaching）检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。

 

验证结果：

      

                      白光对照                                                         DiI 加入15分钟

产品性质
 

运输与保存方法
 

冰袋（wet ice）运输。产品4ºC干燥避光保存，有效期一年。

注意事项
 

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法
 

1. 染色液制备

（1）配置DMSO或EtOH 储存液：储存液用 DMSO或EtOH配置浓度1～5 mM。

注：未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融。

（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1～5 μM的工作液。

注：工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的10倍范围内开始最优浓度的摸索。

2. 悬浮细胞染色

（1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×10⁶/mL。

（2）37 ℃孵育细胞 2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

（3）孵育结束，按1000～1500 rpm离心5min。

（4）倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。

（5）重复（3），（4）步骤两次以上。

3. 贴壁细胞的染色

（1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。

（3）在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

（4）37 ℃孵育细胞 2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸干培养基。

4. 显微镜检测

（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS滤光器的选择参见表1。

（2）多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：

a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；

c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005

5. 流式细胞仪检测

经DiO，DiI，DiD和DiR染色的细胞可分别用流式细胞仪的FL1，FL2，FL3或FL4通道检测。