产品描述：

细胞免疫荧光染色试剂盒-伊文思蓝染色试剂盒

产品货号：MBR086

产品包装：

产品编号	产品名称	包装	保存温度
A	细胞固定液	100ml	-20度
B	伊文思蓝染色液	6ml	-20度

 

自备试剂及耗材：

注射器、组织匀浆器

 

伊文思蓝染色液(0.5%)试剂盒操作步骤(仅供参考)：

 

(一)血脑屏障通透性

1、 取处理后的实验动物(以小鼠为例)，静脉注射 Evans Blue Stain (0.5%)数秒至 1 分钟内， 小鼠眼睛、皮肤出现蓝色。0.5～1h 后处死小鼠，取目的脑组织。

2、 脑组织置于 1.5ml 离心管中，加入 1ml  PBS，  迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆,1000g 离心 10min。

3、 取上清，加入等量三氯乙酸， 孵育 18～24h。

4、 1000g 离心 30 min 或 2000g 离心 15min。

5、 取上述溶液 1～2ml，用分光光度计测 620 nm 处吸光值(OD 值)。同时测定已知不同梯 度的标准依文思蓝的 OD 值，绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测待测样品的依文 思蓝含量。

 

(二)活细胞染色

1、取 100μl 重悬细胞到常规 1.5ml 或 0.5ml 离心管内，入 100μl Evans Blue Stain 轻轻 混匀，染色 3min(染色时间可适当延长，但丌宜超过 10min)。

2、吸取少量经过染色后的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较地进行定量， 每个细胞样品至少数 500 个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。细胞存活率计算公式如下:细胞存活率＝(细胞总数－蓝色细胞数)/细胞总数×100% 

 

注意事项：

1、Evans Blue Stain 对人体有轻微毒性，请小心防护。

2、细胞染色时，注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。

3、血脑屏障通透性实验中，Evans Blue Stain注射量应根据丌同动物以及动物的重量调整。

4、采用低温冷冻离心机进行离心。

5、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

 有效期：  6 个月