产品描述：

DNase I

 

产品货号	产品名称	包装
MBQ1015	DNase I	10mg

 

产品介绍：

        DNase I即Deoxyribonuclease I，中文名称为脱氧核糖核酸酶I，是将单链或双链 DNA 同等程度的随机分解，生成具有 5′-P 末端寡核苷酸的脱氧核糖核酸内切酶。DNase I水解单链或双链DNA后的产物，5'端为磷酸基团，3'端为羟基。

        失活或抑制：加入EDTA至终浓度为2.5mM后，65ºC加热10分钟可使DNase I失活。酚氯仿抽提也可以使DNase I失活。金属离子螯合剂，达到毫摩尔/升浓度的锌离子，0.1%的SDS， DTT、巯基乙醇等还原剂，50-100mM以上盐浓度均对DNase I有显著抑制作用。

        单位定义：以小牛胸腺 DNA 为底物，在25℃、pH5.0的条件下，1 分钟内使反应液的260 nm 吸光度增加 0.001 所需要的酶量定义为 1 个活性单位（Kunitz Unit）。

 

保存说明：

-20℃保存。  

 

使用说明：

1. RT-PCR反应前RNA样品中DNA的去除：

a. 向一无RNA酶的EP管中依次加入下列试剂：

RNA	1µg
Reaction Buffer (10X)	1µl
补充经DEPC处理的去离子水	至9µl
DNase I	1µl

注意：如需处理较大量的 RNA 样品，可以按照比例放大上述反应体系。如果能在上述反应体系中加入适量 Ribonuclease inhibitor以防止 RNA 降解则更佳。

b. 37ºC 孵育 30 分钟。

c. 向上述反应体系中加入 1µl 25mM EDTA，65ºC 孵育 10 分钟以失活 DNase I。注意：在没有鏊合剂如 EDTA 等存在情况下加热，RNA 可被水解。

d. 上述加热处理过的RNA样品即可直接用于处理好的RNA可用作RT-PCR反应的模板。

2. 体外RNA转录后模板DNA的去除：

a. 在每含有0.5µg模板DNA的转录反应体系中加入1U DNase I。注意：在某些情况下，模板DNA完全消化所需的DNase I的量需通过实验进行摸索。

b. 37ºC 孵育15分钟。

c. 酚/氯仿抽提失活DNase I。

 

注意事项：

1. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。