产品描述：

钙黄绿素/Calcein-AM

 

产品货号	产品名称	包装
MBQ1043	钙黄绿素/Calcein-AM	10g

 

产品介绍：

 

中文名：	钙黄绿素乙酰甲酯
英文名：	Calcein AM	分子式：	C46H46N2O23
分子量：	994.86	Cas号：	148504-34-1
溶解性：	溶于乙醇和碱，微溶于水

 

        钙黄绿素（Calcein）是一种激发光波长在495nm处，发射光波长在515nm处的钙离子荧光指示剂。在其浓度大于100 mM时，钙黄绿色荧光自我淬灭。它常被用做络合物指示剂，用来滴定EDTA螯合的钙离子，并且用荧光检测法测定钙离子浓度。

        Calcein-AM是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，Calcein-AM由于在Calcein（钙黄绿素）的基础上加强了疏水性，因此能够轻易穿透活细胞膜。当其进入到细胞质后，酯酶会将其水解为Calcein（钙黄绿素）留在细胞内，发出强绿色荧光。与其它同类试剂（如BCECF-AM和Carboxy-fluorescein diacetate）相比，Calcein-AM是最适合作为荧光 探针去染活细胞的，因为它的细胞毒性很低。

 

保存说明：

密封、阴凉干燥、避光保存。

 

使用说明：

1. 储存液配置：

本品是以粉末形式提供的，根据工作液的浓度将其制成1000X的储存液，配置范围可为1~50mM。例如使用的工作液为5uM，那么可以配置5mM的储存液，也就是向50ug Calcein加入10ul细胞培养基别的DMSO即可得所需浓度的贮存液。

2. Calcein AM染色工作液的配制：

用PBS将其稀释制成1～50um的Calcein,AM溶液，大部分工作液浓度为2-5um，由于不同细胞系的最佳染色条件不同，初次实验建议做梯度实验，以确定Calcein,AM的最佳浓度。梯度筛选原则为使用最低的探针浓度得到最好的荧光效果。

注：Calcein AM的最终浓度建议根据细胞类型和实验实际情况进行适当调整。

3. 染色步骤

a. 对于贴壁细胞：先用胰酶消化细胞，离心收集细胞（1000rmp，3min）

     对于悬浮细胞：直接离心收集细胞

b. 将1/10细胞培养基体积的Calcein,AM工作液重悬细胞， 在37℃培养细胞15～30分钟。

      注：如果细胞本身含有有机阴离子转运体，需加入丙磺舒（probenecid，1-2.2mM）或苯磺唑酮（sulfinpyrazone，0.1-0.25mM）到孵育体系内以降低去酯化染料Calcein泄漏到胞外。

c. 用PBS或适当的缓冲液洗涤细胞两次。

注：如有必要，使用含有阴离子转运抑制剂的缓冲液来进行细胞清洗。

d. 用490nm激发波长，515nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。

注：①如果Calcein,AM很难进入细胞，可以使用表面活性剂，如PluronicF127。

②也可以用1/10浓度的Calcein,AM溶液代替培养基。

注意事项：

1. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2. Calcein AM在潮湿环境中容易分解，并避免反复冻融，收到产品后建议分装并-20ºC密封保存。

3. 由于Calcein AM在PBS等水溶液中不稳定，配制成工作液后需尽快使用。

4. 培养液中的血清和酚红对Calcein AM的染色有一定的影响，建议在加入Calcein AM工作液前充分洗涤细胞。

5. Calcein AM标记的细胞，荧光均匀，而且对短期细胞迁移示踪效果非常好，但荧光的持续时间与细胞类型、培养条件等因素相关，一般在几小时之内，而且有时也会被某些类型细胞迅速外排。如果需要长时间标记细胞，请使用CFDA SE (C1031)等荧光探针。

6. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。