产品描述：

Fluo-3 AM

 

产品货号	产品名称	包装
MBQ1074	Fluo-3 AM	50ug

 

产品介绍：

        Fluo-3,AM是最常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针之一。它穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-3，从而被滞留在细胞内，Fluo-3若以游离配体形式存在时几乎是非荧光性的，但是当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光，最大激发波长为506nm，最大发射波长为526nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488nm左右，发射波长为525～530nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化。

        用于细胞内钙离子检测时，Fluo-3 AM的常用浓度为0.5-5µM。通常用含有0.5-5µM的Fluo-3 AM的适当溶液和细胞一起在20-37ºC孵育15-60分钟进行荧光探针装载，随后适当洗涤，洗涤后可以考虑适当再孵育20-30分钟以确保Fluo-3 AM在细胞内完全转变成Fluo-3。

 

保存说明：

-20℃密封保存。

 

使用说明（仅供参考）：

1. 试剂准备：

a. 配制Pluronic F-127母液：100mg Pluronic F-127粉末中加入0.5ml DMSO，配制成20%(w/v)的DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不要冷藏。如果有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

b. Hanks•balanced salt solution（HBSS）

c. HEPES buffer saline：10mM HEPES，1mM Na2HPO4，137mM NaCl，5mM KCl，1mM CaCl2，0.5mM MgCl2，5mM glucose，0.1% BSA，pH 7.4

2. 操作方法：

a. 用高质量无水DMSO溶解Fluo-3, AM配制成2-5mM的储存液

b. 向 Fluo-3, AM/DMSO 溶液中加入等体积的20% Pluronic F127溶液，Pluronic F127 可以防止 Fluo-3, AM 在 HBSS中聚合并能帮助其进入细胞。

【注】：不建议在Pluronic F127中长期保存Fluo-3, AM溶液。

c. 用 HBSS稀释 Fluo-3, AM溶液，制备 4µM 的 Fluo-3, AM 工作液。

【注】：推荐该探针加载浓度在4-5µM，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。

d. 将 Fluo-3, AM工作液加入细胞，在37℃培养 20 分钟。

e. 加入 5 倍体积的含有1%胎牛血清的 HBSS，再继续培养 40分钟。

f. 用 HEPES buffer saline 洗涤细胞 3 次，然后用 HEPES buffer saline使细胞重悬浮，制成 1×105 cells/ml的溶液。

g. 37℃下培养 10 分钟，然后用该细胞进行荧光钙离子检测。激发波长 506nm，发射波长526nm。

 

注意事项：

1. 标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定最佳条件。

2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。