产品描述：

嘌呤霉素(puromycin;PM )

 

产品货号	产品名称	包装
MBQ1095	嘌呤霉素(puromycin;PM )	25mg

 

产品介绍：

        嘌呤霉素（Puromycin；PM）是一种黑链霉菌属产生的氨基核苷抗生素,广泛用于抑制蛋白合成。CAS号：58-58-2，分子式：C22H29N7O5 ∙ 2HCl，分子量：544.4kD。溶解性：溶于水（50mg/ml），澄清溶液。

        嘌呤霉素作用原理是因其具有与tRNA分子中腺苷相连结的氨基酸末端类似的结构, 能够同氨基酸结合，代替氨酰化的tRNA同核糖体的A位点结合，并掺入到生长的肽链中。

        嘌呤霉素对原核和真核生物的翻译过程均有干扰作用，主要用于蛋白质合成抑制剂，抑制细菌、藻类原生物和哺乳动物细胞生长。

 

保存说明：

-20℃保存。

 

使用说明：

1. 配制方法

用蒸馏水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/mL的母液，经0.22 μm滤膜过滤除菌后分装于-20℃冻存；也可溶于甲醇，配制成10 mg/mL的储存液。

2. 使用方法

a. 在哺乳动物细胞中进行细胞筛选前，应先进行浓度梯度实验确定适合该类细胞的最佳药物浓度即杀死所有宿主细胞的最低浓度（一般哺乳动物细胞选用的有效浓度范围为1 - 15ug/ml）。

b. 细胞转染48h后,换上加入了适宜浓度嘌呤霉素的新鲜培养基，然后放入细胞培养箱中培养。

c. 每隔3-4天换液，更换的培养基为含相同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基。

d. 筛选7天后，评估剩余存活细胞是否全部为转染成功克隆。另外，这些克隆的筛选时间主要依赖于宿主细胞系种类和转染筛选效率。

e. 筛选出的转染成功克隆用选择培养基培养7天，再进行后续实验。

注：需加抗生素筛选的细胞，应为生长状态良好的细胞。另外，如果细胞密度过大将会影响筛选效率，因此，接种细胞的汇合度应不超过25%。

3. 使用浓度：

 

a. 哺乳动物细胞的推荐使用浓度为 μg/mL，最佳浓度需要杀灭曲线来确定。

b. LB琼脂培养基筛选稳定转化125μg/mL。使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节，而且受宿主细胞本身的影响。

4. 灭菌曲线确定方法：

嘌呤霉素有效筛选浓度跟细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢情况及细胞所处细胞周期等均有关。为了筛选到稳定表达的细胞株，确定杀死未转染细胞的最低嘌呤霉素浓度至关重要。建议初次做实验的客户一定要建立适合自身实验体系的杀灭曲线。若细胞对嘌呤霉素耐受性较高，则可能需要大于常规浓度。

a. 第1天：24孔板：6-8 × 104/孔的细胞密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。37℃细胞孵育过夜。

b. 第2天：准备筛选培养基：含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（如1-15μg/mL，至少5个梯度，参考文献对应细胞相应杀灭大概浓度）；

往孵育过夜后的细胞内更换新鲜配制的筛选培养基；之后37℃孵育细胞。

c. 第4天：更换新鲜的筛选培养基，并观察细胞存活率。

d. 根据细胞的生长状态，约2-3天更换新鲜的筛选培养基。

e. 每日监测细胞，观察存活细胞率，从而确定抗生素筛选开始4-6天内有效杀死非转染或者所有非转导细胞的药物最低浓度

 

注意事项：

1. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。