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产品名称:Delivector 质粒DNA转染试剂
英文名称:
产品编号:MBX005 产品包装:0.5ml 产品价格:300

产品描述:

Delivector质粒DNA转染试剂

产品货号

产品名称

包装

MBX005

Delivector质粒DNA转染试剂

500ul

 

产品介绍

Delivector是一款优秀、低成本、值得信赖的瞬时性转染试剂。在HEK293和CHO表达系统中,可在大的生产容器内(从96孔板到100L生物反应器)提供连续性的高基因表达。

本品是Delivector的无菌溶液,浓度为1mg/ml,可直接使用。按照DNA:Delivector=1:3的比例来操作,1ml本品足以用来转染330μg DNA。

保存说明:

-20℃保存,有效期1年

使用说明:(贴壁细胞)

1. 铺板:

       转染前18-24h进行铺板,调整合适的细胞密度(参考表1),使其在转染时细胞密度达60-80%。

2. 转染:(以6孔板为例)

a. 转染前1-2h,每孔替换为3ml含2%血清的新鲜生长培养基。

b. 制备Delivector-DNA转染复合物(请严格按照以下步骤进行):

①往300μl无血清培养基加入2μg质粒DNA,混匀。

②在混合物内加入6μl Delivector(1mg/ml)(DNA/Delivector=1:3),混匀。

③无菌环境,室温静置30min以形成Delivector-DNA转染复合物。

④用移液枪上下吹打3次,轻轻混匀。

c. 将Delivector-DNA转染复合物转到孔内。轻轻晃动培养皿或轻微涡旋,使复合物分散均匀。

3. 孵育:

a. 37℃,5% CO2培养箱内培养细胞,转染12-18h,去除含Delivector-DNA复合物的培养液,更换新鲜的培养基。

b. 通常,转染36-48h后能检测到重组蛋白表达。一般在转染后72-96h能观察到最大水平的表达。

注意事项:

1. 收到本品或第一次使用前,请根据单次用量分装后置于-20℃冻存,尽量减少反复冻融次数。

2. 本品为无菌溶液,请严格按照无菌操作进行。

3. 请使用高质量的无内毒素质粒。通过260 nm光吸收测定DNA浓度,260nm / 280nm比值确定DNA纯度(比值应该在1.8~2.0的范围之内)。如有条件,请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。

4. 请使用保存适当和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染。细胞如果是近期复苏的液氮冻存细胞,请在转染前至少传代两次

5. 对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞,在转染前两天铺板可显著提高重组蛋白的表达水平。如果选择转染前两天铺板,可适当降低铺板密度,以确保转染时细胞的汇合度仍为60-80%。

6. 对于接触抑制敏感的细胞,可适当降低铺板密度。

7. 推荐用商业化的无血清培养基比如Opti-MEM I来稀释DNA和DELIVECTOR,制备转染复合物。

8. 转染过程中请不要使用抗生素

9. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

10. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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