产品描述：

内毒素去除试剂盒

产品货号：MBX107

产品包装：

产品编号	产品名称	包装
A	亲和树脂预装柱	1.5ml
B	再生缓冲液	100ml
C	平衡缓冲液	100ml
D	流速控制器	1个
E	无热源接收管	6支
F	无热源枪头（1ml）	24支
G	保护液（20%乙醇）	50ml

保存条件：

冰袋运输。4℃保存，有效期2年。

使用说明：
1. 需另外准备的设备与试剂：

a. 铁架台

b. 3M的NaCl、0.1 M的NaOH和0.1 M的HCl，用于调节样品PH值和离子强度。

2. 样品处理：

a. 样品在上样前建议离心或用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子

b. 纯化前可用处理过的氯化钠，0.1 M的NaOH或0.1 M的HCl来调节离子强度或pH值。

【注】：① 虽然结合内毒素的pH范围在5-10，但是7-8的pH范围是纯化的最佳范围。

② 合适的离子浓度可降低非特异性吸附，保持0.15-0.5M NaCl的条件可以得到一个较好的去除效果。

3. 活化树脂：

a. 将预装柱置于铁架台，垂直固定，去除顶部盖子，打开流速控制器，使保护液在重力作用下流干

b. 加入5 mL再生缓冲液（预冷），调节流速控制器，保持流速在0.25 mL/min（或1滴/6 s），待再生缓冲液流干，再加入5 mL再生缓冲液（预冷），再重复操作2次，确保体系保持无热原存在

c. 即使是第一次使用也必须进行这一步操作平衡树脂

4. 平衡树脂：

活化完毕后加入6 mL的平衡缓冲液（预冷），沿柱管内壁均匀加入其中，保证清洗柱管的内壁，调节流速控制器，保持流速在0.5 mL/min，流干平衡缓冲液，再按此操作重复2次。

5. 内毒素去除：

a. 取1.5 mL样品加到平衡后的层析柱中，调节流速在0.25 mL/min（或1滴/6 s），不接收流出液

b. 样品流完，继续添加样品，样品可以加满柱管，同时收集流出液，即为除热原的样品

c. 样品流完后，再添加1.5 mL平衡液，并与之前的流出液合并，降低样品的损失

d. 检测样品浓度及内毒素水平

6. 再次使用：

如果流出样品内毒素水平未能达到预期值，需要将预装柱按照步骤3、4重新再生、平衡，然后上样纯化

7. 保存条件：

如果预装柱用完后需要保存，先用10mL平衡缓冲液（预冷）平衡柱子，待平衡液流完，加入6 mL的保护液并于4℃保存。

 

注意事项：

1. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

 

附表：问题与解答

问题	可能原因	解决方法
去除效率低	样品与树脂接触时间太短	降低样品流速，或通过低温孵育来提高结合效率
	样品的pH值没有在7-8之间	调节pH值至7-8
	去除或检测系统受到外来因素污染	使用无热原的实验仪器，保证体系不受污染
	内毒素与目的蛋白结合太牢固	① 优化样品的pH值，使它们解离 ② 增加样品与树脂的接触时间
样品损失高	样品通过非特异性作用结合在树脂上	增加样品和平衡缓冲液中NaCl的含量
	目的蛋白与内毒素结合牢固，一起结合在树脂上	① 优化样品的pH值，使它们解离 ② 增加样品与树脂的接触时间
样品被污染	树脂用于处理过其他的样品	尽量避免使用同一个预装柱处理不同样品。如果无法避免，可以在处理一个样品之后，用10-20mL 2M NaCl淋洗树脂，然后再处理另外一种样品