一、表 面 抗 体 染 色

* 细胞样本：

1. 取100 μl细胞悬液；如果不能及时上机，请用1%的多聚甲醛固定10分钟。

2. 加入适量表面抗体，室温避光孵育20 min（抗体用量和孵育条件详见抗体说明书）;

3. 加入1~2 ml   pbs，1000 rpm离心5 min，弃上清；

4. 用500 μl-1000ul PBS重悬细胞，上机检测并分析。

*全血样本：

1. 取一定体积抗凝全血（人100 μl，小鼠取30~50 μl）；

2. 加入适量表面抗体，室温避光孵育20 min（抗体用量和孵育条件详见抗体说明书）；

3. 加入红细胞裂解液（时间人和动物的不一致，请参照说明书）；

4.加入1~2 ml  PBS，1000rpm离心5 min，弃上清；

5. 用500 μl-1000ul PBS重悬细胞，上机检测并分析。

 

注意：如不能立即检测，用0.5 ml 1%多聚甲醛重悬，4℃避光保存，24 h内上机分析。

 

二 、胞 内 抗 体 染 色

1. 制备好细胞悬液，取100 μl（全血样本：人100 μl，小鼠30~50 μl）染表面抗体，室温避光孵育15 min，不用洗涤；
2. 加入红细胞裂解液，离心后，用pbs重悬细胞；

3. 加入100 μl  固定剂，室温孵育15 min；

4. 加入3 ml流式染色缓冲液，1000rpm离心5 min，弃上清，涡旋振荡，使残留液体混匀沉淀；

5. 加入100 μl  破膜剂和胞内抗体（和/或相应的同型对照），室温避光孵育15 min；

6. 加入3 ml流式染色缓冲液，1000rpm离心5 min，弃上清收集细胞；

7. 用500 μl-1000ul 流式染色缓冲液重悬细胞，上机检测并分析。

 

注意：如不能立即检测，用0.5 ml  1%多聚甲醛重悬，4℃避光保存，24 h内上机分析。